Determination of 1,5-Benzothiazepine-ａ-Phenyl-β- Lactam with Thin-Layer Chromatography* Li Yuan, Sun Na, Wang Jiye, Du Caiyun# (Department of chemistry, Hebei Normal University, #Department of Basic Course, Shijiazhuang,050016 Hebei Handan Agricultural College,Handan,057150) Abstract 1,5-Benzothiazepine-α-phenyl-β-lactam in reaction mixture has been separated by TLC on CMC-silica gel GF254 plate with ethyl acetate-petroleum ether(1:8, v/v) as eluant. The quantitative analysis was carried out by using a CS-930 TLC scanner.The RSD in quantitative of this method was 1.13%,r=0.9985, the average recovery was 100.1%. Key words Thin-Layer Chromatography, β-lactam, 1,5-Benzothiazepine 摘要 用CMC-硅胶薄层板,乙酸乙酯+石油醚(1:8,v/v)为展开剂,对反应混合物中1,5-苯并硫氮杂-α-苯基-β-内酰胺直接进行定性分析,并使用 CS-930 双波长薄层扫描仪进行定量测定。方法的相对标准偏差是1.13%,相关系数是0.9985,平均回收率是100.1%。 关键词 薄层色谱法 β-内酰胺 1,5-苯并硫氮杂 苯并硫氮杂苯基-β-内酰胺的薄层色谱测定法＊ 李媛 孙娜 王继业 杜彩云# (河北师范大学化学系 石家庄 050016 #河北邯郸高等农业专科学校基础部 邯郸 057150) 苯并硫氮杂是一类具有多种生理活性的七元杂环化合物。近年来, 此类化合物与各类试剂的环加成反应引起人们的很大兴趣[1-5]。但在这些研究中,反应产率一般都用分离产率表示,这给研究工作带来不便,特别是对于产率较低的反应,这种表示方法还会产生较大误差。我们在对1,5-苯并硫氮杂(简称杂）[2+2]环加成反应研究的基础上,用自制的硅胶板很好地分离了反应物、 产物以及各种副产物和杂质,并建立了产物的薄层色谱测定法。本方法操作简便、快速、 测定精度高, 而且对于杂化合物与其它酰氯的环加成反应的定量分析有重要的参考价值。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 岛津CS-930双波长薄层色谱扫描仪(日本Shimadzu)、层析柱(2cm×30cm)、硅胶G、硅胶60GF254(青岛海洋化工集团公司)、其它试剂均为分析纯试剂。 1.2 薄层板的制备 取一定量的硅胶60GF254，加入适量0.5% 的羧甲基纤维素钠的水溶液，搅匀后，均匀地铺在20cm×20cm的玻璃板上，厚约0.3mm,自然凉干后，置于105℃烘箱中活化1h，然后放入干燥器中备用。 1.3 标准样品的制备 将反应液进行柱色谱分离（Ｖ乙酸乙酯:Ｖ石油醚＝1:8)，收集Rf=0.32组分点。经元素分析、MS、NMR证实该组分是环加成反应的产物1,5-苯并硫氮杂-α-苯基-β-内酰胺（简称β- 内酰胺）。TLC验证只有一个点。 1.4 薄层分离 用定量毛细管将标准溶液、样品溶液点于同一块薄层板上, 将板置于层析缸内,用乙酸乙酯+石油醚(1/8,v/v)在室温下上行展开10cm,取出,吹干溶剂,在λ=254nm紫外灯下照射,可以看到合成产物中的β-内酰胺与其它点分开。第三个点(Rf=0.32)为所合成的β-内酰胺。 1.5 测试条件 测定波长λ1=275nm,参考波长λ2=310nm,狭缝1.2mm×1.2mm,灵敏度中,线性仪 SX=3,在所选条件下采用透射法锯齿扫描进行测定。 ２ 结果与讨论 2.1 β-内酰胺样品的薄层分离 反应停止后,混合物中除产物外,还有杂、开环产物及其它杂质。见图1。
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| 6 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 |

图1 β-内酰胺及其杂质的薄层图谱
1.杂;2.开环产物;3.β-内酰胺;4-6.其它杂质.

2.2 工作曲线及检出限

称取自制的β-内酰胺标样0.0049g，用二氯甲烷溶解并定容于10ml容量瓶中,配成4.9μg/μL的标准溶液。点样，展开，测定，以点样量对峰面积作图,得标准曲线,其回归方程为:Y=25028X+5048;r=0.9985;线性范围为0.245～4.900μg;最低检出限为0.147μg。
2.3 精密度实验
以二氯甲烷为溶剂，配制1.10μg/μL的样品溶液，在同一薄层板上点相同量斑点,用外标两点法展开测定。结果见表1。

表 1 精密度实验
测定数据/μg | 平均值/μg | S | RSD/%
2.20 | 2.05 | 2.14 | 2.05 | 2.16 | 2.03 | 2.18 | 2.12 | 0.064 | 3.00

2.4 样品分析

在同一薄层板上,点0.5、1、2μL三个标准溶液点和样品溶液点(6×2μL)。展开后,按所述实验方法扫描,平行测定4次,由平均值在标准曲线上求出β-内酰胺的含量。结果见表2。

表 2 样品分析结果(n=6)
β-内酰胺含量测定/% | 平均值/% | S/% | RSD/%
18.68 | 18.21 | 18.66 | 18.61 | 18.52 | 0.21 | 1.13

2.5 回收率实验
在β-内酰胺样品中添加标样,点样展开后,薄层扫描,求出回收率。 测定结果见表3。

表 3 回收率的测定(n=4)
未加标准测定值/μg | 添加标准量/μg | 实测结果/μg | 回收率/% | 平均回收率/%
0.4002 | 0.98 | 1.3938 | 101 | 100.1
0.8180 | 0.98 | 1.7902 | 99.2 |

3 参考文献
[1] LAN Ruoxi,JIN Sheng, LI Zhengming. New Heterocyclic System SynthesisⅡ.Chinese Chemical Letters.,1992,3(1): 9-10
[2] Aron Szollosy,George Kotovych. The synthesis and the nuclear magnetic resonance study of β- lactam derivatives of 1, 5-benzothiazepines. Can.J. Chem.,1988,66: 279-282
[3] XING Qiyi,LI Yuan,DU Caiyun et al.The synthesis and steric structure of 1,5-benzothiazepine-α-chloro-β-lactams. Chinese Chemical Letters., 1998,10
[4] Fodor L,Szabo J,Sohar P. Cycloaddition Reactions of 1,3-benzothiazepines I. Tetrabedron, 1981,37:963-966
[5] Sohar P,Fodor L,Szabo J et al. Cycloaddition Reactions of 1,3-benzothiazepines-6. Tetrahedron., 1984,40:4387-4393

李媛 女，42岁，副教授，从事有机化学教学和科研工作。河北省教委资助课题
98-11-24收稿，99-03-11修回